Глюкокортикостероиды являются гормонами, регулирующими пролиферацию, дифференцировку и апоптоз различных типов клеток в ответ на стресс. Существует две главные изоформы глюкокортикоидного рецептора (ГР) – α- и β-изоформа. α-ГР непосредственно связывается с гормоном и направляется в ядро клетки, где происходит активация или супрессия тех или иных таргетных генов. β-изоформа является доминантным ингибитором α-ГР и играет одну из ключевых ролей в развитии резистентности к системным глюкокортикостероидам (СГК) при многих заболеваниях. Однако, механизмы, запускающие кодирование мРНК β-изоформы ГР, в особенности при пузырчатке, на сегодняшний день, недостаточно изучены.

Целью нашей работы явилось исследование полиморфизма гена ГР у больных пузырчаткой и здоровых доноров. В нашем исследовании мы оценили, является ли A3669G полиморфизм ГР предрасполагающей аллелью к развитию пузырчатки, связан ли он с тяжестью процесса и возникновением стероидной резистентности у этих пациентов. 

Этический комитет Сеченовского Университета одобрил подписанные информированные согласия больных и здоровых доноров (номер протокола – 03-22 от 3 февраля 2022 г.).

В нашем исследовании принимали участие 72 больных пузырчаткой и 92 здоровых доноров. В когорте больных было 48 женщин и 24 мужчины. Средний возраст пациентов составил 50.4±13.7 лет. В качестве статистических методов мы использовали χ тест Пирсона для сравнения частоты генотипов у больных пузырчаткой и здоровых доноров, используя программу R-studio. Отклонения от равновесия Харди-Вайнберга в обеих группах тестировалось с помощью критерия Фишера.

ДНК изолировалась из гранулоцитов крови, после центрифугирования с помощью «QIAamp DNA Blood Mini Kit» метода. Наличие A3669G полиморфизма ГР определялось с помощью анализ расплава с высоким разрешением – метода, позволяющего наиболее точно выявить мутации и полиморфизмы генов, а также прямого секвенирования. Использовались следующие праймеры: 5′CAGACTGTAAAACCTTGTGTGGA3′ и 5′CTGCCAATTCGGTACAAATC3′. Ожидаемый фрагмент 173 спаренных оснований очищался с помощью «QIAquick Gel Extraction Kit» и 40 нг очищенной ДНК использовалось в цикле реакции секвенирования.

Таким образом, A3669G полиморфизм ГР статистически значимо чаще встречался у больных пузырчаткой (n=72; 25%) по сравнению со здоровыми донорами (n=92; 3.2%; p<0.001). У девяти, семи и двух больных пузырчаткой наблюдалась тяжелая, средняя и легкая степень заболевания согласно индексу PDAI. Более того, больные с тяжелой степенью тяжести не отвечали на терапию СГК. Следует сделать вывод, что A3669G аллель ГР являлась предрасполагающей к развитию пузырчатки, а также генетическим биомаркером развития нечувствительности к терапии СГК у больных с преимущественно тяжелым течением кожного процесса.